Lipase-LQ
Kinetic colorimetric. Liquid
BEIS19-I 25/07/17 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com
LIPASE-LQ
Quantitative determination of lipase
IVD
Store at 2-8ºC
PRINCIPLE OF THE METHOD
The pancreatic lipase in presence of colipase, desoxycholate and calcium
ions, hydrolyses the substrate 1-2-O-dilauryl-rac-glycero-3-glutaric acid-(6'
-methylresorufin)-ester. The sequence of reactions involved in the
enzymatic direct lipase determination is the following:
1-2-O-dilauryl-rac-glycero-3-glutaric-(6' -methylresorufin)-ester
Lipase
1-2-O-dilauryl-rac-glycerol + Glutaric-6'-methylresorufin-ester
(no stable)
OH
Glutaric acid + Methylresorufin
The rate of methylresorufin formation, measured photometrically, is
proportional to the catalytic concentration of lipase present in the sample.
CLINICAL SIGNIFICANCE
Lipase (LPS) is a pancreatic enzyme necessary for the absorption and
digestion of nutrients that catalyzes the hydrolysis of glycerol esters of fatty
acids. Determination of LPS is used for diagnosis of diseases of pancreas
such as acute and chronic pancreatitis and obstruction of the pancreatic
duct1,7,8. Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it
should integrate clinical and other laboratory data.
REAGENTS
R 1
Buffer
TRIS pH 8.3
Colipase
Desoxycholate
Taurodesoxycholate
40 mmol/L
1 mg/L
1,8 mmol/L
7,2 mmol/L
R 2
(micro-emulsion)
Tartrate pH 4,0
Lipase Substrate
Calcium chloride (CaCl2)
15 mmol/L
0,7 mmol/L
0,1 mmol/L
LIPASE CAL
Standard. Lyophilised human serum
The LPS activity (U/L methylresorufin at 37ºC) is
indicate on the label of the vial.
PRECAUTIONS
LIPASE CAL Components from human origin have been tested and found
to be negative for the presence of HBsAg, HCV, and antibody to HIV (1/2).
However handle cautiously as potentially infectious.
PREPARATION
- R1 – R2 Ready to use. Stability after opening 90 days at 2-8ºC.
R2 Mix gently before use (Note 1)
.
- LIPASE CAL: Dissolve with 1 mL of distilled water. Cap and mix gently
to dissolve contents. Stability: 7 days at 2-8ºC or 3 months at –20ºC.
STORAGE AND STABILITY
All the components of the kit are stable until the expiration date on the label
when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and contaminations
prevented during their use. Do not use reagents over the expiration date.
Signs of reagent deterioration:
- Presence of particles and turbidity.
- Blank absorbance (A) at 580 nm 1,4.
- R 2 is a turbid orange-colored micro-emulsion, discard if turning to red.
ADDITIONAL EQUIPMENT
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 580 nm.
- Thermostatic bath at 37º C ( 0,1ºC)
- Matched cuvettes 1,0 cm light path.
- General laboratory equipment.
SAMPLES
Serum or plasma with sodium citrate, EDTA or heparin1
.
Avoid repeated frozen and unfrozen. Stability: 2 days at 2-8ºC.
PROCEDURE
1. Assay conditions:
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . 580 nm
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm light path
Constant temperature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC
2. Adjust the instrument to zero with distilled water.
3. Pipette into a cuvette(Note 2):
Blank Standard / Sample
R 1 (mL) 1,0 1,0
R 2 (L) 200 200
Distilled water (L) 10 --
Standard / Sample (L) -- 10
4. Mix, incubate at 37ºC for 1 minute.
5. Read initial absorbance (A) of the sample, start the stopwatch and read
absorbances at 1 minute intervals thereafter for 2 minutes.
6. Calculate the difference between absorbances and the average absorbance
differences per minute (A/min).
CALCULATIONS
(A/min) Sample - (A /min) Blank = (A /min) of sample
(A/min) Standard - (A/min) Blank= (A/min) of Standard
A/min Standard
A/min Sample
x Calibrador activity = U/L of lipase in the sample
Units: One international unit (IU) is the amount of enzyme that transforms 1 mol
of substrate per minute, in standard conditions. The concentration is expressed in
units per litre of sample (U/L).
Conversion factor: LPS [U/L] x 0,01667= LPS [µkal/L]
QUALITY CONTROL
Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210).
If control values are found outside the defined range, check the instrument,
reagents and technique for problems.
Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective
actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
REFERENCE VALUES1
38 U/L (U/L methylresorufin at 37ºC).
These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its own
reference range.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Measuring range: From detection limit of 5 U/L to linearity limit of 250 U/L.
Precision:
Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
Mean (U/L) 40,2 59,35 38,5 58,9
SD 0,410 0,875 1,10 1,25
CV (%) 1,02 1,47 2,86 2,13
Sensitivity: 1 U/L= 0,00059792 (A)
Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
The results obtained using 101 samples were the following:
Correlation coefficient (r)2
:0,99732.
Regression equation: y= 0,50054x + 3,9443.
The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
INTERFERENCES
Triglycerides at 300 mg/dL interfere on determination reducing the activity of
enzyme of 6%. Hemoglobin concentration lower than 150 mg/dL and Bilirubin
lower than 20 mg/dL do not interfere2,3,4
.
A list of drugs and other interfering substances with lipase determination has been
reported5,6
.
NOTES
1. In some storage conditions (i.e. storage at a temperature lower that the one
indicate) a precipitate may appear in the vial that will not influence that the
reagent performance; however, it is recommended to resuspend the product
with a slight rotation.
2. In order to avoid contamination it is recommended to use disposable material.
3. SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
BIBLIOGRAPHY
1. McNeely M. Lipase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Toronto. Princeton 1984; 1130-1134, 892.
2. Neumann U et al. Comptes Rend. 4 colloque de Pont-a-Musson, Masson 627-634
(1979)
3. Junge W et al. J.Clin.Chem.Clin.Biochem., 21 445-451 (1983).
4. Neumann U et al. Methods of Enzymatics Analysis, 3rd ed. Vol.4, 26-34 (1984)
5. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
6. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
7. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
8. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
PACKAGING
Ref: 1001275
Ref: 1001274
R1: 4 x 10 mL, R2: 1 x 8 mL, CAL: 1 x 1 mL
R1: 2 x 10 mL, R2: 1 x 4 mL, CAL: 1 x 1 mL
Cont.
Lipasa-LQ
Cinético colorimétrico. Liquido
BEIS19-E 25/07/17 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com
LIPASE-LQ
Determinación cuantitativa de lipasa
IVD
Conservar a 2-8ºC
PRINCIPIO DEL MÉTODO
La lipasa pancreática en presencia de colipasa, iones calcio y desoxicolato,
hidroliza el sustrato 1-2-O-dilauril-rac-glicerol-3-glutárico-(6' -metilresorufina)-
ester. Las secuencias de las reacciones para la determinación directa de la lipasa
son las siguientes:
1-2-O-dilauril-rac-glicerol-3-glutárico -(6' -metilresorufina)-ester
Lipasa
1-2-O-dilauril-rac-glicerol + Ácido glutárico-6'-etilresorufina-ester
(no estable)
OH
Ácido glutárico + Metilresorufina
La velocidad de formación de metilresorufina determinado fotometricamente, es
proporcional a la concentración catalítica de lipasa en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLÍNICO
La lipasa (LPS) es una enzima pancreática necesaria para la absorción y
digestión de los nutrientes, cataliza la hidrólisis de los esteres de glicerol de los
ácidos grasos. La determinación de la LPS es útil para el diagnóstico de
enfermedades del páncreas como pancreatitis aguda y obstrucción
pancreática1,7,8. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos
los datos clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS
R 1
Tampón
TRIS pH 8,3
Colipasa
Desoxicolato
Taurodesoxicolato
40 mmol/L
1 mg/L
1,8 mmol/L
7,2 mmol/L
R 2
(microemulsión)
Tartrato pH 4,0
Sustrato de Lipasa
Cloruro calcico (CaCl2)
15 mmol/L
0,7 mmol/L
0,1 mmol/L
LIPASA CAL
Patrón. Suero humano liofilizado.
La actividad de la LPS (U/L de metilresorufin a 37ºC) está
indicada en la etiqueta del vial
PRECAUCIONES
LIPASE CAL Todos los componentes de origen humano han resultado ser
negativos para el antígeno HBs, HCV y para el anti-HIV (1/2). Sin embargo,
deben tratarse con precaución como potencialmente infecciosos.
PREPARACIÓN
- R1 – R 2 Listos para su uso.
R2 Mezclar suavemente antes de usar (Nota 1)
.
- LIPASE CAL: Reconstituir (
) con 1 mL de agua destilada. Tapar y mezclar
suavemente hasta disolver su contenido. Estabilidad: 7 días a 2-8ºC o 3
meses a –20ºC.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a
2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancias del Blanco a 580 1,4.
- R 2 micro-emulsión de color naranja, descartar si se vuelve roja.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 580 nm.
- Baño termoestable a 37ºC ( 0,1ºC)
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS
Suero o plasma con citrato sódico, EDTA o heparina1
.
No congelar y descongelarlas las muestras repetidas veces.
Estabilidad: 2 días a 2-8ºC.
PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 580 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz
Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta(Nota 2):
Blanco Calibrador/ Muestra
R1 (mL) 1,0 1,0
R2 (L) 200 200
Agua destilada (L) 10 --
Patrón / Muestra (L) -- 10
4. Mezclar, incubar a 37ºC 1 minuto.
5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer
la absorbancia cada minuto durante 2 minutos.
6. Calcular el promedio de la diferencia de absorbancia por minuto (A/min).
CÁLCULOS
(A/min) Muestra - (A/min) Blanco= (A/min) Muestra
(A/min) Patrón - (A/min) Blanco= (A/min) Calibrador
ΔA/min Calibrador
ΔA/min Muestra
x Actividad Calibrador = U/L de lipasa en la muestra
Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 mol
de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentración se expresa en
unidades por litro (U/L).
Factor de conversión: LPS [U/L] x 0,01667= LPS [µkal/L]
CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el
instrumento, los reactivos y la técnica.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones
en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
VALORES DE REFERENCIA1
38 U/L (U/L de metilresorufina a 37ºC).
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
propios valores de referencia.
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Rango de medida: Desde el límite de detección 5 U/L hasta el límite de linealidad 250
U/L.
Precisión:
Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
Media (U/L) 40,2 59,35 38,5 58,9
SD 0,410 0,875 1,10 1,25
CV (%) 1,02 1,47 2,86 2,13
Sensibilidad analítica: 1 U/L= 0,00059792 (A)
Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
Los resultados obtenidos con 101 muestras fueron los siguientes:
Coeficiente de regresión (r)2
: 0,99732.
Ecuación de la recta de regresión: y= 0,50054x + 3,9443.
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
INTERFERENCIAS
Triglicéridos a 300 mg/dL interfieren en la determinación de la lipasa reduciendo su
actividad un 6%. Hemoglobina hasta 150 mg/dL y bilirrubina hasta 20 mg/dL no
interfieren2,3,4
.
Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinación
de la Lipasa5,6
.
NOTAS
1. En algunas condiciones de almacenamiento (p.e. almacenaje a temperatura
inferior a la recomendada) puede aparecer precipitación, que no influye en su
funcionalidad; es recomendable resuspender mediante rotación suave del vial.
2. A fin de evitar contaminaciones se recomienda utilizar material de plástico de un
solo uso.
3. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este
reactivo en distintos analizadores.
BIBLIOGRAFÍA
1. McNeely M. Lipase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
Princeton 1984; 1130-1134, 892.
2. Neumann U et al. Comptes Rend. 4 colloque de Pont-a-Musson, Masson 627-634 (1979)
3. Junge W et al. J.Clin.Chem.Clin.Biochem., 21 445-451 (1983).
4. Neumann U et al. Methods of Enzymatics Analysis, 3rd ed. Vol.4, 26-34 (1984)
5. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
6. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
7. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
8. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
PRESENTACIÓN
Ref: 1001275
Ref: 1001274
R1: 4 x 10 mL, R2: 1 x 8 mL, CAL: 1 x 1 mL
R1: 2 x 10 mL, R2: 1 x 4 mL, CAL: 1 x 1 mL Cont.
Détermination quantitative de lipase
IVD
Conserver à 2-8ºC
PRINCIPE DE LA METHODE
La lipase pancréatique en présence de colipase, ions calcium et
désoxycholate, hydrolyse le substrat 1-2-O-dilauryl-rac-glycérol-3-glutarique-(6'
-méthyl-résorufine)-ester. Les séquences des réactions visant à déterminer
directement la lipase sont les suivantes :
1-2-O-dilauryl-rac-glycérol-3-glutarique -(6' -méthyl-résorufine)-ester
Lipase
1-2-O-dilauryl-rac-glycérol + Acide glutarique-6'-méthylrésorufine-ester (non stable)
OH
Acide glutarique + Méthyl-résorufine
La vitesse de formation de méthyl-résorufine, déterminé par photométrie, est
proportionnelle à la concentration catalytique dans l’échantillon testé.
SIGNIFICATION CLINIQUE
La lipase (LPS) est une enzyme pancréatique nécessaire à l’absorption et la
digestion des nutriments. Elle catalyse l’hydrolyse des esters de glycérol des
acides gras. La détermination de la LPS sert au diagnostic de maladies du
pancréas telles que la pancréatite aiguë et l’obstruction pancréatique1,7,8
. Le
diagnostic clinique doit être réalisé en tenant compte de toutes les données
cliniques et de laboratoire.
RÉACTIFS
R 1
Tampon
TRIS pH 8,3
Colipase
Désoxycholate
Taurodésoxycholate
40 mmol/L
1 mg/L
1,8 mmol/L
7,2 mmol/L
R 2
Substrat
(microémulsion)
Tartrate pH 4,0
Substrat de Lipase
Chlorure de calcium (CaCl2)
15 mmol/L
0,7 mmol/L
0,1 mmol/L
LIPASE CAL
Étalon. Sérum humain lyophilisé.
L’activité de la LPS (U/L de méthyl-résorufine à 37ºC) est
indiquée sur l’étiquette du flacon
PRÉCAUTIONS
LIPASE CAL Tous les composants d’origine humaine sont apparus comme
négatifs pour l’antigène HBs, HCV et pour l’anti-HIV (1/2). Toutefois, ils doivent
être traités avec précaution, car ils sont potentiellement infectieux.
PRÉPARATION
- R1 – R 2 Prêts à l’emploi. Stabilité une fois ouvert 90 jours à
2-8ºC. R2 Mélanger doucement avant d’utiliser (Remarque 1)
.
- LIPASE CAL: Reconstituer (
) avec 1 mL d’eau distillée. Boucher et
mélanger doucement jusqu’à dissoudre son contenu. Stabilité : 7 jours à 2-
8ºC ou 3 mois à –20ºC.
CONSERVATION ET STABILITE
Tous les composants du kit sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée
sur l’étiquette, et si les flacons sont maintenus hermétiquement fermés à 2-
8ºC, à l’abri de la lumière et des sources de contamination.
Ne pas utiliser les réactifs en dehors de la date indiquée.
Indices de détérioration des réactifs:
- Présence de particules et turbidité.
- Absorbation du blanc à 580 1,4.
- R 2 microémulsion de couleur orange, ne pas considérer si devient rouge.
MATERIEL SUPPLEMENTAIRE
- Spectrophotomètre ou analyseur pour les lectures à 58
- 0 nm.
- Bain thermostable à 37ºC ( 0,1ºC)
- Cuvettes de 1,0 cm d’éclairage.
- Equipement classique de laboratoire.
ÉCHANTILLONS
Sérum ou plasma avec citrate de sodium, EDTA ou héparine
1
.
Ne pas congeler ni décongeler les échantillons plusieurs fois.
Stabilité : 2 jours à 2-8ºC.
PROCEDURE
1. Conditions de test:
Longueur d’ondes: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 580 nm
Cuvette:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm d’éclairage
Température . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC
2. Régler le spectrophotomètre sur zéro en fonction de l’eau distillée.
3. Pipeter dans une cuvette(Remarque 2):
Blanc Étalon/ Échantillon
R1 (mL) 1,0 1,0
R2 (L) 200 200
Eau distillée (L) 10 --
Étalon / Échantillon (L) -- 10
4. Mélanger et incuber à 37ºC pendant 1 minute
5. Lire l’absorbation (A) initiale de l’échantillon, mettre en route le chronomètre et lire
l’absorbation à chaque minute pendant 2 minutes.
6. Calculer la moyenne de l’augmentation d’absorbation par minute (A/min).
CALCULS
(A/min) Échantillon - (A/min) Blanc= (A/min) Échantillon
(A/min) Étalon - (A/min) Blanc= (A/min) Étalon
Étalon
chantillon
ΔA/min
ΔA/min É
x Activité Calibrateur = U/L de lipase dans l’échantillon
Unités: L’unité internationale (UI) correspond à la quantité d’enzymes qui converti 1
mol de substrats par minute, dans des conditions standard. La concentration est
exprimée en unité/litre (U/L).
Facteur de conversion : LPS [U/L] x 0,01667= LPS [µkal/L]
CONTROLE DE QUALITE
Il est conseillé d’analyser conjointement les échantillons de sérum dont les valeurs ont
été contrôlées: SPINTROL H Normal et pathologique (Réf. 1002120 et 1002210).
Si les valeurs se trouvent en dehors des valeurs tolérées, analyser l’instrument, les
réactifs et la technique.
Chaque laboratoire doit disposer de son propre contrôle de qualité et déterminer les
mesures correctives à mettre en place dans le cas où les vérifications ne
correspondraient pas aux attentes.
VALEURS DE REFERENCE1
38 U/L (U/L de méthyl-résorufine à 37ºC).
Ces valeurs sont données à titre d’information. Il est conseillé à chaque laboratoire de
définir ses propres valeurs de référence.
CARACTERISTIQUES DE LA METHODE
Plage de mesure: Depuis la limite de détection de 5 U/L, jusqu’à la limite de linéarité
de 0 20 U/L.
Si la concentration de l’échantillon est supérieure à la limite de linéarité, diluer 1/10
avec du ClNa 9 g/L et multiplier le résultat final par 10.
Précision:
Intra-série (n= 20) Inter-série (n= 20)
Moyenne (U/L) 40,2 59,35 38,5 58,9
SD 0,410 0,875 1,10 1,25
CV (%) 1,02 1,47 2,86 2,13
Sensibilité : 1 U/L = 0,00059792 (A)
Exactitude: Les réactifs SPINREACT (y) ne montrent pas de différences
systématiques significatives lorsqu’on les compare à d’autres réactifs commerciaux (x).
Les résultats obtenus avec 101 échantillons ont été les suivants:
Coefficient de corrélation (r)2
: 0,99732.
Equation de la Coubre de régression: y=0,50054x +3,9443
Les caractéristiques de la méthode peuvent varier suivant l’analyseur employé.
INTERFÉRENCES
Les triglycérides à 300 mg/dL interfèrent avec la détermination de la lipase en
réduisant son activité de 6 %. L’hémoglobine jusqu’à 150 mg/dL et la bilirubine jusqu’à
20 mg/dL n’interfèrent pas2,3,4
.
Il a été rapporté que certaines drogues et autres substances interfèrent avec la
détermination de la lipase
5,6
.
REMARQUES
1. Dans certaines conditions de stockage (par ex. stockage à température
inférieure à celle recommandée) une précipitation peut apparaître ; elle n’influe
pas sur sa fonctionnalité ; mais il est recommandé de renouveler la suspension
en tournant doucement le flacon.
2. Afin d’éviter les contaminations, il est conseillé d’utiliser du matériel en plastique
à usage unique.
3. SPINREACT dispose de consignes détaillées pour l’application de ce
réactif dans différents analyseurs.
BIBLIOGRAPHIE
1. McNeely M. Lipase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
Princeton 1984; 1130-1134, 892.
2. Neumann U et al. Comptes Rend. 4 colloque de Pont-a-Musson, Masson 627-634
(1979)
3. Junge W et al. J.Clin.Chem.Clin.Biochem., 21 445-451 (1983).
4. Neumann U et al. Methods of Enzymatics Analysis, 3rd ed. Vol.4, 26-34 (1984)
5. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
6. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
7. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
8. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
PRÉSENTATION
Ref: 1001275
Ref: 1001274
R1: 4 x 10 mL, R2: 1 x 8 mL, CAL: 1 x 1 mL
R1: 2 x 10 mL, R2: 1 x 4 mL, CAL: 1 x 1 mL Cont.
Lipase-LQ
Cinético colorimétrico. Liquido
BEIS19-P 25/07/17 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com
LIPASE-LQ
Determinação quantitativa de lipase
IVD
Conservar a 2-8ºC
PRINCÌPIO DO MÉTODO
A lipase pancreática na presença de colipase, iões cálcio e desoxicolato,
hidrolisa o substrato 1-2-O-dilauril-rac-glicerol-3-glutárico-(6' -metilresorufina)-
ester. As sequências das reacções para a determinação directa da lipase são
as seguintes:
1-2-O-dilauril-rac-glicerol-3-glutárico -(6' -metilresorufina)-ester
Lipase
1-2-O-dilauril-rac-glicerol + Ácido glutárico-6'-etilresorufina
ester (não estável)
OH
Ácido glutárico + Metilresorufina
A velocidade de formação de metilresorufina determinado fotometricamente, é
proporcional à concentração catalítica de lipase na amostra testada.
SIGNIFICADO CLINICO
A lipase (LPS) é uma enzima pancreática necessária para a absorção e digestão
dos nutrientes, catalisa a hidrólise dos ésteres de glicerol dos ácidos gordos. A
determinação da LPS é útil para o diagnóstico de patologías do pâncreas como
pancreatite aguda e obstrução pancreática1,7,8. O diagnóstico clínico deve ser
feito tendo em conta todos os dados clínicos e de laboratorio.
REAGENTES
R 1
Tampão
TRIS pH 8,3
Colipase
Desoxicolato
Taurodesoxicolato
40 mmol/L
1 mg/L
1,8 mmol/L
7,2 mmol/L
R 2
Substrato
(microemulsión)
Tartrato pH 4,0
Substrato de Lipase
Cloreto cálcico (CaCl2)
15 mmol/L
0,7 mmol/L
0,1 mmol/L
LIPASE CAL
Padrão. Soro humano liofilizado.
A actividade da LPS (U/L de metilresorufina a 37ºC) está
indicada na etiqueta do frasco
PRECAUÇÕES
LIPASE CAL Todos os componentes de origem humana deram resultado
negativo para o antigénio HBs, HCV e para o anti-HIV (1/2). No entanto, devem
manusear-se com precaução como potencialmente infecciosos.
PREPARAÇÃO
- R1 – R 2 Prontos para utilização. Uma vez aberto, é estável por 90
días a 2-8ºC. R2 Misturar suavemente antes de usar (Nota 1)
.
- LIPASE CAL: Reconstituir (
) com 1 mL de água destilada. Tapar e
misturar suavemente até dissolução do seu conteúdo. Estabilidade: 7 dias a
2-8ºC ou 3 meses a –20ºC.
CONSERVAÇÃO E ESTABILIDADE
Todos os componentes do kit são estáveis, até ao prazo de validade indicado no
rótulo, mantendo-se os frascos bem fechados a 2-8ºC, protegidos da luz e
evitando-se a contaminação.
Não utilizar reagentes fora de prazo.
Indicadores de deterioração dos reagentes:
- Presença de partículas e turvação.
- Absorvâncias do Branco a 580 nm 1,4.
- R 2 micro-emulsão de cor laranja, descartar se ficar tornar
avermelhada.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro ou analisador para leituras a 580 nm.
- Banho termostável a 37ºC ( 0,1ºC)
- Cuvetes de 1,0 cm de passo de luz.
- Equipamento habitual de laboratório.
AMOSTRAS
Soro ou plasma com citrato sódico, EDTA ou heparina1
.
Não congelar e descongelar as amostras repetidas vezes.
Estabilidade: 2 dias a 2-8ºC.
PROCEDIMENTO
1. Condições do ensaio:
Comprimento de onda: . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . 580 nm
Cuvete:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm passo de luz
Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . 37ºC
2. Ajustar o espectrofotómetro a zero frente a água destilada.
3. Pipetar para uma cuvete(Nota 2):
Branco Padrão/ Amostra
R1 (mL) 1,0 1,0
R2 (L) 200 200
Agua destilada (L) 10 --
Padrão / Amostra (L) -- 10
4. Misturar, incubar a 37ºC 1 minuto.
5. Ler a absorvância (A) inicial da amostra, ligar o cronómetro e ler a
absorvância a cada minuto durante 2 minutos.
6. Calcular a média do aumento das absorvâncias por minuto (A/min).
CÁLCULOS
(A/min) Amostra - (A/min) Blanco= (A/min) Amostra
(A/min) Padrão - (A/min) Blanco= (A/min) Padrão
ΔA/min Padrão
ΔA/min Amostra
x Actividade Calibrador = U/L de lipase da amostra
Unidades: A unidade internacional (UI) é a quantidade de enzima que converte 1 mol
de substrato por minuto, em condições padrão. A concentração é expressa em unidades
por litro (U/L).
Fator de conversão: LPS [U/L] x 0,01667= LPS [µkal/L]
CONTROLO DE QUALIDADE
É conveniente analisar juntamente com as amostras os soros controlo valorizados:
SPINTROL H Normal e Patológico (Ref. 1002120 e 1002210).
Se os valores se encontrarem fora do intervalo de tolerência, devem ser revistos o
instrumento, os reagentes e o calibrador.
Cada laboratorio deve dispôr do seu próprio controlo de qualidade e estabelecer
correcções quando os controlos não cumprem com o estabelecido pelo intervalo de
tolerancia.
VALORES DE REFERÊNCIA1
38 U/L (U/L de metilresorufina a 37ºC).
Estes valores são orientativos. É recomendável que cada laboratório estabeleça os seus
próprios valores de referência.
CARACTERISTICAS DO METODO
Intervalo de medida: Desde o limite de detecção 5 U/L até ao limite de linearidade 250
U/L.
Se a concentração da amostra é superior ao limite de linearidade, diluir 1/10 com ClNa
9 g/L e multiplicar o resultado final por 10.
Precisão:
Intrasérie (n= 20) Intersérie (n= 20)
Média (U/L) 40,2 59,35 38,5 58,9
SD 0,410 0,875 1,10 1,25
CV (%) 1,02 1,47 2,86 2,13
Sensibilidade: 1U/L = 0,00059792 (A)
Exactidão: Os reagentes SPINREACT (y) não amostram diferenças sistemáticas
significativas quando se comparam com outros reagentes comerciais (x).
Os resultados obtidos com 101 amostras foram os seguintes:
Coeficiente de regressão (r)2
: 0,99732.
Equação da recta de regressão: y= 0,50054x + 3,9443.
As características do método podem variar segundo o equipamento utilizado.
INTERFERÊNCIAS
Triglicéridos a 300 mg/dL interferem na determinação da lipase reduzindo a sua
actividade em cerca de 6%. Hemoglobina até 150 mg/dL e bilirrubina até 20 mg/dL não
interferem2,3,4. Foram descritas varias drogas e outras substancias que interferem na
determinação da lipase5,6
.
NOTAS
1. Nalgumas condições de armazenamento (p.e. armazenagem a temperatura
inferior à recomendada) pode aparecer precipitação, que não influi a sua
funcionalidade; é recomendável voltar a rodar suavemente o frasco para
resuspensão.
2. A fim de evitar contaminações recomenda-se a utilização de material de plástico
de utilização única.
3. SPINREACT dispõe de instruções detalhadas para a aplicação deste
eagente em diferentes equipamentos.
BIBLIOGRAFIA
1. McNeely M. Lipase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
Princeton 1984; 1130-1134, 892.
2. Neumann U et al. Comptes Rend. 4 colloque de Pont-a-Musson, Masson 627-634 (1979)
3. Junge W et al. J.Clin.Chem.Clin.Biochem., 21 445-451 (1983).
4. Neumann U et al. Methods of Enzymatics Analysis, 3rd ed. Vol.4, 26-34 (1984)
5. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
6. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
7. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
8. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
APRESENTAÇÃO
Ref: 1001275
Ref: 1001274
R1: 4 x 10 mL, R2: 1 x 8 mL, CAL: 1 x 1 mL
R1: 2 x 10 mL, R2: 1 x 4 mL, CAL: 1 x 1 mL Cont.
